包被液里的几种添加剂：缓冲体系、、、、糖、、、、蛋白
、
、表面活性剂各有什么用

免疫层析试纸条的包被液
，
，不只是抗体加缓冲液那么简单。。

划到NC膜上的检测线（T线）和质控线（C线），，需要同时满足几个要求
：抗体要能稳定地吸附在膜上、、、、线条要清晰锐利等。。
。

这些要求单靠抗体和缓冲液很难同时满足。。所以包被液里通常会加一些辅助成分——选择合适的缓冲体系、、、糖类、
、蛋白类添加剂、、表面活性剂。。。每种添加剂解决不同的问题，，，加对了能明显改善线型和稳定性，，加错了反而添乱。。

下面把几种常用添加剂的作用和用法拆开讲
。。

一、、缓冲体系：决定蛋白能不能吸附上去

缓冲液是包被液的基础。
。。。它的作用不只是把抗体溶解，，更重要的是提供合适的pH和离子强度，
，，让蛋白能够牢固地吸附到NC膜上
。。

pH怎么选

NC膜与蛋白的结合依赖于静电相互作用。。pH直接影响蛋白的带电状态。。如果pH偏离蛋白的等电点太远，，蛋白和膜之间的静电作用力不够
，
，
，吸附效率就会下降。
。

用什么缓冲盐

常用的缓冲盐有PB（磷酸盐）
、
、Tris、
、、
、碳酸盐（CB）
、
、硼酸盐（BB）等几种。。磷酸盐缓冲液（PB）是最常用的选择，，，因为它配方简单、
、、
、pH稳定、、兼容性好。。。
。

离子强度要低

这是一个容易被忽略的点。。含150mM NaCl的盐缓冲液在NC膜上不容易形成清晰的蛋白线条，
，，因为高离子强度干扰了蛋白结合所必需的静电相互作用。
。。

包被液首选低离子强度缓冲液（如10-20mM PB），，
，
，尽量不要用PBS（含150mM NaCl）。。。PBS里的盐会屏蔽蛋白与膜之间的静电作用，，导致吸附不牢
、、、、线条扩散。。。

二、、、、糖类
：保护抗体，，，改善线型

糖类是包被液里最常用的添加剂之一。。
。
。蔗糖和海藻糖是两种主流选择
。。

蔗糖

最常见
，，，成本低。
。。。蔗糖在干燥过程中能形成玻璃态基质，，，，把抗体分子固定在活性构象里，，，，防止干燥变性。
。。

海藻糖

保护效果比蔗糖更好
，
，，，玻璃化转变温度更高，，，，吸湿性更低。。。在需要长期储存或高温环境下，，，
，海藻糖的优势更明显
。。。

两种糖可以配合使用。。。蔗糖和海藻糖各有优势
，，，
，复配使用可以同时利用蔗糖的低成本和海藻糖的高保护性。
。

糖能解决什么问题

• 线条出现“反白”（中间淡、
  、、边缘深），，加糖有改善作用
• 抗体在干燥过程中活性下降
  ，，，加糖保护
• 储存后信号衰减快，，
  ，加糖延长货架期

需要注意：糖不是越多越好
。。
。浓度过高会导致干燥后线型扩散或线条变宽。。。如果T线出现过宽或中空
，，，可以先考虑把糖浓度降下来。。。。

三、、、、蛋白类添加剂：保护抗体
，，辅助封闭

包被液里最常用的蛋白添加剂是BSA（牛血清白蛋白）。。。

BSA在包被液里的作用

BSA在包被液里的作用主要有两个：一是作为载体蛋白，，保护低浓度抗体在干燥过程中不变性；二是辅助封闭NC膜上未结合的位点，，减少后续层析中的非特异性吸附
。。

注意事项

BSA浓度不能太高。。。。BSA和抗体都在竞争NC膜上的结合位点。
。
。。BSA浓度过高，，，
，可能抢占抗体与膜的结合空间，
，，
，反而降低T线信号。。

如果项目本身信号足够强、、、、背景也不脏，，
，包被液里可以不加BSA。
。

四、、表面活性剂：控制线型，，防止中空

表面活性剂在包被液里的作用比较特殊。。。
。它主要用来改善线条形态，，，防止出现“中空”或“锯齿”现象。。

Tween-20

最常用的非离子表面活性剂。。包被液中加入少量Tween-20，，可以增加亲水力
，，避免线条中空现象
。。。

Tween-20的用量必须严格控制

NC膜上结合的蛋白会被去污剂置换。。。。包被液中Tween-20浓度过高，，可能竞争性抑制蛋白与膜的吸附，，导致线条信号减弱甚至脱落
。。

如果表面活性剂加在样品垫处理液或结合垫处理液里，，，，对NC膜的影响会小很多。。。包被液里加表活要格外小心。。。。

五、
、、添加剂浓度参考

以上建议浓度均需要结合实际梯度实验结果确定用量。。
。