包被液里的几种添加剂：缓冲体系、
、、、糖
、、、蛋白、、
、表面活性剂各有什么用

免疫层析试纸条的包被液，，不只是抗体加缓冲液那么简单。。

划到NC膜上的检测线（T线）和质控线（C线），，需要同时满足几个要求：抗体要能稳定地吸附在膜上、
、、、线条要清晰锐利等。。。

这些要求单靠抗体和缓冲液很难同时满足。。
。所以包被液里通常会加一些辅助成分——选择合适的缓冲体系、、、、糖类、、蛋白类添加剂、、
、、表面活性剂。。每种添加剂解决不同的问题，，
，加对了能明显改善线型和稳定性，，，加错了反而添乱。。

下面把几种常用添加剂的作用和用法拆开讲。。。

一、、、缓冲体系
：决定蛋白能不能吸附上去

缓冲液是包被液的基础
。。。它的作用不只是把抗体溶解，，更重要的是提供合适的pH和离子强度，，，让蛋白能够牢固地吸附到NC膜上。
。

pH怎么选

NC膜与蛋白的结合依赖于静电相互作用。。pH直接影响蛋白的带电状态。
。。如果pH偏离蛋白的等电点太远，，蛋白和膜之间的静电作用力不够，，吸附效率就会下降。。
。
。

用什么缓冲盐

常用的缓冲盐有PB（磷酸盐）、、、、Tris、
、碳酸盐（CB）、、硼酸盐（BB）等几种。。磷酸盐缓冲液（PB）是最常用的选择
，，因为它配方简单、、
、、pH稳定、、、兼容性好。。

离子强度要低

这是一个容易被忽略的点。
。。
。含150mM NaCl的盐缓冲液在NC膜上不容易形成清晰的蛋白线条，
，，，因为高离子强度干扰了蛋白结合所必需的静电相互作用。。
。。

包被液首选低离子强度缓冲液（如10-20mM PB），
，，尽量不要用PBS（含150mM NaCl）。。PBS里的盐会屏蔽蛋白与膜之间的静电作用，，，导致吸附不牢、、
、、线条扩散。。
。。

二
、
、、糖类：保护抗体，
，
，改善线型

糖类是包被液里最常用的添加剂之一。。蔗糖和海藻糖是两种主流选择。。。
。

蔗糖

最常见，，，，成本低。
。。
。蔗糖在干燥过程中能形成玻璃态基质，，，把抗体分子固定在活性构象里，
，防止干燥变性
。
。。

海藻糖

保护效果比蔗糖更好
，，，，玻璃化转变温度更高，，吸湿性更低
。
。。
。在需要长期储存或高温环境下，，
，
，海藻糖的优势更明显。。。

两种糖可以配合使用
。
。。蔗糖和海藻糖各有优势，
，，复配使用可以同时利用蔗糖的低成本和海藻糖的高保护性。。。

糖能解决什么问题

• 线条出现“反白”（中间淡、
  、、、边缘深）
  ，，，，加糖有改善作用
• 抗体在干燥过程中活性下降，，，，加糖保护
• 储存后信号衰减快，，，加糖延长货架期

需要注意：糖不是越多越好。
。浓度过高会导致干燥后线型扩散或线条变宽。。。。如果T线出现过宽或中空，
，，可以先考虑把糖浓度降下来。。。
。

三
、、、蛋白类添加剂：保护抗体，
，辅助封闭

包被液里最常用的蛋白添加剂是BSA（牛血清白蛋白）。。。。

BSA在包被液里的作用

BSA在包被液里的作用主要有两个
：一是作为载体蛋白，
，保护低浓度抗体在干燥过程中不变性；二是辅助封闭NC膜上未结合的位点
，，，，减少后续层析中的非特异性吸附。。。。

注意事项

BSA浓度不能太高。。。。BSA和抗体都在竞争NC膜上的结合位点。。BSA浓度过高，，可能抢占抗体与膜的结合空间，，，，反而降低T线信号。。

如果项目本身信号足够强、、
、、背景也不脏
，，，包被液里可以不加BSA。。

四、、、表面活性剂：控制线型，，防止中空

表面活性剂在包被液里的作用比较特殊。。它主要用来改善线条形态，，防止出现“中空”或“锯齿”现象。。
。
。

Tween-20

最常用的非离子表面活性剂。。。包被液中加入少量Tween-20
，，，，可以增加亲水力，，，避免线条中空现象。。

Tween-20的用量必须严格控制

NC膜上结合的蛋白会被去污剂置换。。。包被液中Tween-20浓度过高，，可能竞争性抑制蛋白与膜的吸附，，导致线条信号减弱甚至脱落。。

如果表面活性剂加在样品垫处理液或结合垫处理液里，，，对NC膜的影响会小很多。。。。包被液里加表活要格外小心。。。

五
、、添加剂浓度参考

以上建议浓度均需要结合实际梯度实验结果确定用量。。。